Рекомбинантная биотинлигаза
E. сoli - BirA
Активирует биотин, образуя биотинил-5'-аденилат, и переносит биотин на белки и пептиды. Рекомбинантный BirA - белок весом 36 кДа, содержащий 6xHis тег на С-конце. Для биотинилирования с помощью BirA описаны несколько коротких пептидных последовательностей, наиболее известный - пептид AviTag™ длиной 15 аминокислот (GLNDIFEAQ
KIEWHE). BirA специфически биотинилирует боковую цепь лизина в этом пептиде. AviTag работает либо на N-, либо на C-конце целевого белка. Если субстрат не содержит His-тега, BirA можно удалить после биотинилирования, пропустив реакционную смесь через колонку, содержащую Ni сефарозу.
Биотинилирование белков и пептидов in vitro. Связывание биотина со стрептавидином или авидином является одним из самых сильных известных нековалентных биологических взаимодействий. Взаимодействие (стрепт)авидина и биотина широко используется в биологических исследованиях и биотехнологии на протяжении десятилетий.
Мечение очищенных белков биотином — мощный способ захвата, иммобилизации и функционализации белков, а также мультимеризации или образования мостиковых молекул.
Ферментативное биотинилирование с помощью BirA более специфично, чем химическое биотинилирование, которое часто приводит к образованию гетерогенных продуктов, которые могут иметь нарушенную функцию.
- Фермент поставляется в буфере, содержащем 10-50% глицерина, PBS
- Температура хранения -20°– -80°С
- Чистота ≥90% по результатам ПААГ геля
- Концентрация – 1 мкг/мкл
- Температурный диапазон активности фермента 4-38°С (оптимум температуры 30 °С)