Фермент для биофармацевтики и лабораторных исследований.

Рекомбинантная форма эндонуклеазы, полученная из бактерии Serratia marcescens и экспрессированная в E. coli.

Данный фермент представляет собой идеальное решение для удаления нуклеиновых кислот в биофармацевтическом производстве и лабораторной практике. Работает в виде гомодимера и требует иона магния.

Характерной особенностью фермента является его неспецифическое действие: он гидролизует любые формы ДНК и РНК (двуцепочечные, одноцепочечные, линейные и кольцевые) независимо от последовательности, расщепляя фосфодиэфирные связи до олигонуклеотидов длиной 3–5 оснований

• Полное расщепление нуклеиновых кислот;
• Не проявляет протеолитической активности — гарантирует сохранность целевых белков;
• Мгновенно снижает вязкость клеточных лизатов;
• Сохраняет активность в широком диапазоне условий (pH 6.0–10.0, 0–42°C) и совместима с детергентами, восстановителями и мочевиной;
• Специфическая активность: Исключительно высокая удельная активность (> 1.0 × 10⁶ ед./мг белка).

Фермент семейства ULP- протеиназ — убиквитин-подобная цистеиновая протеаза, осуществляющая протеолитический процессинг рекомбинантных белков с тегом SUMO.

Фермент продуцируется Saccharomyces cerevisiae, рекомбинантная форма несет His-Tag и экспрессируется в E. coli. Наличие тега His позволяет использовать фермент для очистки белков на никелевых колонках. При этом концентрация имидазола в составе элюирующего буфера выше 150 мМ снижает эффективность процессинга.

SUMO протеаза специфично распознает в рекомбинантном гибридном белке третичную структуру SUMO, а не конкретную аминокислотную последовательность.

Для работы с рекомбинантными белками, в которых последовательность SUMO добавлена к N-концу целевого белка
Сайт расщепления расположен между первой N-концевой аминокислотой целевого белка  и последовательностью SUMO.
Расщепление происходит строго после С-концевого глицина SUMO.

Рекомбинантная биотинлигаза E. сoli - BirA

Активирует биотин, образуя биотинил-5'-аденилат, и переносит биотин на белки и пептиды. Рекомбинантный BirA - белок весом 36 кДа, содержащий 6xHis тег на С-конце. Для биотинилирования с помощью BirA описаны несколько коротких пептидных последовательностей, наиболее известный - пептид AviTag™ длиной 15 аминокислот (GLNDIFEAQKIEWHE). BirA специфически биотинилирует боковую цепь лизина в этом пептиде. AviTag работает либо на N-, либо на C-конце целевого белка. Если субстрат не содержит His-тега, BirA можно удалить после биотинилирования, пропустив реакционную смесь через колонку, содержащую Ni сефарозу.

Биотинилирование белков и пептидов in vitro. Связывание биотина со стрептавидином или авидином является одним из самых сильных известных нековалентных биологических взаимодействий. Взаимодействие (стрепт)авидина и биотина широко используется в биологических исследованиях и биотехнологии на протяжении десятилетий.
Мечение очищенных белков биотином — мощный способ захвата, иммобилизации и функционализации белков, а также мультимеризации или образования мостиковых молекул.
Ферментативное биотинилирование с помощью BirA более специфично, чем химическое биотинилирование, которое часто приводит к образованию гетерогенных продуктов, которые могут иметь нарушенную функцию.

• Фермент поставляется в буфере, содержащем 10-50% глицерина, PBS
• Температура хранения -20°– -80°С
• Чистота ≥90% по результатам ПААГ геля
• Концентрация – 1 мкг/мкл
• Температурный диапазон активности фермента 4-38°С (оптимум температуры 30 °С)

Протеаза вируса гравировки табака (Tobacco Etch Virus)

Состоит из каталитического домена массой около 27 кДа с N-концевым 6xHis тегом. Эта протеаза расщепляет белки, узнавая линейную последовательность из семи аминокислотных остатков следующего состава: Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln ↓ Gly/Ser (E-N-L-Y-F-Q ↓ G/S). Следует отметить, что несколько с меньшей эффективностью расщепляются последовательности, где С-концевая аминокислота заменена на аланин (A), метионин (M), цистеин (C) или гиститдин (H). Фермент продуцируется в E.coli. Для разрезания белка сумо протеаза требует 1-5 мМ DTT.

• Фермент растворен в буфере, содержащем 10-50% глицерина, 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM NaCl, 0,5 мМ ЭДТА и 1 мМ ДТТ
• «Стандартный» реакционный буфер для TEV-протеазы — это 50 мМ Трис-HCl (pH 8,0), 0,5 мМ ЭДТА и 1 мМ ДТТ.
• Температура хранения -20° – -80°С
• Чистота ≥95% по результатам ПААГ геля
• Ферментативная активность 5 Ед/мкл
• Температурный диапазон активности фермента 4-38°С (оптимум температуры 34 °С, однако, для лучшего сохранения целевого рекомбинантного белка рекомендуется инкубация в течение ночи при 4°С. Активность TEV протеазы снижается при 4°С в 3-4 раза)
• Диапазон рН активности фермента 4,0-9,0 (оптимум рН: 8,0)
• Диапазон ионной силы 0-300 мМ NaCl (оптимум 50 мМ NaCl). Активность в 500 мМ NaCl составляет 50% от активности в отсутствие соли.